【產(chǎn)品信息】
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| 革蘭氏染色 | HKF3029 | 張 | 25元 |
一、 實(shí)驗(yàn)原理
革蘭氏染色法是微生物學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，可用來區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-），基本原理是基于細(xì)菌細(xì)胞壁化學(xué)組分不同。細(xì)菌經(jīng)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成不溶于水的結(jié)晶紫-碘復(fù)合物。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌由于細(xì)胞壁較厚，不含類脂，富含肽聚糖并交聯(lián)形成致密網(wǎng)格結(jié)構(gòu)，在用乙醇處理時(shí)肽聚糖網(wǎng)孔收縮，能將結(jié)晶紫-碘復(fù)合物阻留在細(xì)胞壁內(nèi)，使其呈現(xiàn)結(jié)晶紫的紫色。而革蘭氏陰性細(xì)菌因其細(xì)胞壁薄，肽聚糖含量低且交聯(lián)松散。遇乙醇時(shí)富含類脂的外膜溶解，在細(xì)胞壁上出現(xiàn)較大縫隙，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物流出，因此經(jīng)乙醇脫色后細(xì)胞又成無色。此時(shí)再經(jīng)番紅復(fù)染，革蘭氏陰性細(xì)菌將被染成紅色。1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自來水洗。
2、革蘭氏染色：切片滴加革蘭氏染液A滴染10s-30s，水洗，甩干；滴加革蘭氏染液B1min，水洗，甩干；巴氏吸管吸取革蘭氏染液C從載玻片磨砂面一端沖洗組織進(jìn)行分化，至切片流下的革蘭氏染液C呈無色即可，水洗，甩干；將切片浸革蘭氏染液D溶液1s水洗，鏡檢，烤箱烤干。
3、脫水：將烤干的切片快速入三缸無水乙醇快速脫水，依次1s、3s、5s。
4、透明封片：切片放入干凈的二甲苯5min透明，中性樹膠封片。
5、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。
注意事項(xiàng)：
1、染色過程中的革蘭氏染液C分化是關(guān)鍵步驟，需注意分化程度。
2、盡量不要重復(fù)染色，分化液在脫去片子顏色的同時(shí)也改變了細(xì)胞壁的通透性，影響了最后結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、冬季氣溫較低時(shí)，染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。
杭州浩克生物
